更新時間:2021-08-06
ELISA實驗反應時間不同是由抗原與抗體決定的,抗體與酶標抗體反應一般在37℃ 2h~3h達到高峰,豬免疫球蛋白M檢測試劑盒時間太短,敏感性下降,時間太長,吸附的抗原或復合物可能脫落。
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請教問題:
問 :
1 在稀釋抗體中加入的蛋白穩定劑是什么?
2 在試劑盒的研發中,您認為什么是重要的?是抗體嗎?
3 ELISA檢測的靈敏度是由抗體的特性決定的,那么有否可能通過優化各種條件使得成型的試劑盒的靈敏度得到較大的提高?
4 顯色系統中為什么不用OPD呢?它比TMB靈敏呀?
答 :
1)一般就先用一些無關蛋白,如果不行可以添加少量甘油,如果還不行則需購買專門的穩定劑了。
2)原料重要,只要是原料無論抗體和抗原都很重要。
3)檢測的靈敏度主要是由原料決定的,但可以通過調整濃度以及其它條件進行改善。
4)現在的國內商品試劑盒都使用TMB了,TMB實際上比OPD靈敏,相對來說OPD比較穩定,但是OPD有致癌性。
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實驗過程中孵育可能碰到的問題:
& 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*
& 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*
相應解決辦法:
& 貼封片或加蓋
& 按說明步驟嚴格控制操作時
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