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關(guān)于?ELISA標(biāo)本的處理
更新時(shí)間:2023-03-30   點(diǎn)擊次數(shù):787次

一般來(lái)說(shuō),再5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4°C。本在冰箱中保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致血清IgG聚合,是間接法的試劑本底加深,超過(guò)一周測(cè)定的需-20°C保存。凍結(jié)血清溶解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分不均,應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡,渾濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾,澄清后再檢測(cè)。測(cè)抗體的血清的標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè),以少量分裝冰存,保存血清只采集是就應(yīng)注意無(wú)菌操作,也可加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎鼓蝗臉?biāo)本因纖維蛋白元的干擾而造成假陽(yáng)性,建議勁量不使用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。


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ELISA標(biāo)本的處理:

1.血清:室溫血液私人凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。


2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,如有沉淀形成,應(yīng)再次離心


3.尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。


4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成分時(shí),用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)仔細(xì)收集上清,檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成分時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右,通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成分。


5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量,加入一定量的PBS,PH7.4,用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆茫瑯?biāo)本融化后任然保持2-8°C的溫度,加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用,


6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行試驗(yàn),若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20°C保存,單應(yīng)避免反復(fù)凍融。


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