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現(xiàn)代生物技術(shù)均通過細(xì)胞系作為載體來進(jìn)行，無論是基因治療、干細(xì)胞、克隆技術(shù)都在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行的。細(xì)胞的生長需要一定的營養(yǎng)環(huán)境，用于維持細(xì)胞生長的營養(yǎng)基質(zhì)稱為培養(yǎng)基，即指所有用于各種目的的體外培養(yǎng)、保存細(xì)胞用的物質(zhì)，就其本意上講為人工模擬體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境，使細(xì)胞在此環(huán)境中有生長和繁殖的能力。它是提供細(xì)胞營養(yǎng)和促進(jìn)細(xì)胞生長增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。細(xì)胞培養(yǎng)基其組成成分主要有：水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)離子及其他一些入核酸降解物、激素等。

細(xì)胞培養(yǎng)基的檢測方法

1 .澄清度

水是細(xì)胞培養(yǎng)基的溶劑。細(xì)胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分只有*溶解于水才能被細(xì)胞吸收攝取，細(xì)胞才能生長增殖，因此是否溶解以及培養(yǎng)液是否透明澄清直接影響培養(yǎng)基使用。該項目是通過對水溶解后的細(xì)胞培養(yǎng)基的澄清度檢查，判斷澄清度。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅨB進(jìn)行。

2. pH值

哺乳類動物細(xì)胞生長需要合適的酸堿度，pH過高或者過低都會導(dǎo)致細(xì)胞死亡。pH值的測定也可以檢查細(xì)胞培養(yǎng)基的批間差。清大天一標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定取規(guī)定量供試品，用注射用水(水溫20℃-30℃)溶解至1L，加入規(guī)定量到上述溶液中，用與細(xì)胞培養(yǎng)基溶液pH值相近的兩點標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校準(zhǔn)后的酸度計進(jìn)行測定。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅥH進(jìn)行；加入規(guī)定量的到上述溶液中，按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅥH進(jìn)行

3.干燥減量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

細(xì)胞培養(yǎng)基具有吸濕性，在空氣中放置水分會很快升高，干燥減量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示產(chǎn)品中含濕量。細(xì)胞培養(yǎng)基是有菌制劑，其豐富的營養(yǎng)成分有利于微生物生長，控制細(xì)胞培養(yǎng)基中的水分可以防止微生物的繁殖，保持細(xì)胞培養(yǎng)基的養(yǎng)分。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅧL干燥失重測定法進(jìn)行。

4.滲透壓

溶劑通過半透膜由低濃度向高濃度溶液擴(kuò)散的現(xiàn)象稱為滲透，阻止?jié)B透所需施加的壓力，稱為滲透壓。細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中，動物細(xì)胞借助K+、Na+維持滲透平衡。大多數(shù)細(xì)胞對滲透壓有一定的耐受性。但是培養(yǎng)液滲透壓過高容易使細(xì)胞脫水萎suo，培養(yǎng)液滲透壓過低容易使細(xì)胞膨脹破裂，因此要控制培養(yǎng)基的滲透壓范圍。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅨG滲透壓摩爾濃度測定法進(jìn)行。

5.細(xì)菌內(nèi)毒素

細(xì)菌內(nèi)毒素是許多病原性細(xì)菌所產(chǎn)生的毒素。它的特殊性在于不是細(xì)菌或細(xì)菌的代謝產(chǎn)物，而是細(xì)菌死亡或解體后才釋放出來的一種具有生物活性的物質(zhì)。培養(yǎng)基細(xì)菌內(nèi)毒素過高，對生物制品疫苗(如狂犬、乙肝疫苗)、基因工程藥品等注射用的藥品都需要檢查細(xì)菌內(nèi)毒素。因此本項目的檢驗符合生物制品質(zhì)量控制要求。常規(guī)細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)定為<10 EU/ml。稱取本品規(guī)定量(見表4-12)的1/100，加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水10 mL溶解，吸取該溶液0.1 mL加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水3.9 mL，混勻即得試樣。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅪE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中的凝膠法進(jìn)行。

6.微生物限度

細(xì)胞培養(yǎng)基不是無菌產(chǎn)品，其中的微生物在一定條件下會吸收細(xì)胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)滋生繁殖，導(dǎo)致變質(zhì)失效?？刂萍?xì)胞培養(yǎng)基中細(xì)菌和霉菌，是延長細(xì)胞培養(yǎng)基有效期的方法之一。清大天一在參考《中華人民共和國藥典》2005版二部附錄第100頁的口服給藥制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)，并嚴(yán)于該標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品的細(xì)菌數(shù)每1g不得超過200個，霉菌數(shù)每1g不得超過50個。

 稱取樣品1 g，加入無菌純化水10 mL溶解，混勻即得試樣。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅪJ微生物限度檢查法進(jìn)行，檢查項目為細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)。檢查法采用平皿法。

7.細(xì)胞生長試驗

 這是一個性能特性表述的要求。功能就是培養(yǎng)哺乳類動物細(xì)胞，因此經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng)效果的檢驗是產(chǎn)品質(zhì)量優(yōu)劣的直觀表述，這也是很多生物制藥用戶要求的一項指標(biāo)。目前國內(nèi)尚無細(xì)胞培養(yǎng)和計數(shù)的法定方法，可參考《體外培養(yǎng)的原理與技術(shù)》中細(xì)胞計數(shù)fa論述的內(nèi)容給出。按產(chǎn)品說明書配制培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，前四天用含10%小牛血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)，觀察細(xì)胞形態(tài)并計數(shù)，檢查細(xì)胞培養(yǎng)基是否有促生長的能力。后三天用不含小牛血清的培養(yǎng)液維持培養(yǎng)，觀察細(xì)胞形態(tài)并計數(shù)，檢查細(xì)胞培養(yǎng)基中是否有不利細(xì)胞生長的毒素。

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